ПЦР диагностика при туберкулезе легких у детей и взрослых что это такое и как проводиться

ПЦР диагностика при туберкулезе легких у детей и взрослых что это такое и как проводиться

Микобактерии туберкулёза, ДНК Myc. tuberculosis в крови

Описание

Микобактерии туберкулёза, ДНК M. tuberculosis, bovis complex, качественный — определение ДНК M. tuberculosis в крови, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Метод ПЦР позволяет идентифицировать в биологическом материале искомый участок генетического материала и обнаружить единичные молекулы ДНК микроорганизма, не выявляемые другими методами. Принцип метода основан на многократном увеличении числа копий, специфичных для данного возбудителя участка ДНК.

С помощью ПЦР-анализа можно диагностировать инфекцию в остром периоде и выявлять случаи носительства.

ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей, даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

Туберкулёз — инфекционное заболевание. Он вызывается человеческим (M. tuberculosis) и бычьим (M. bovis) типом микобактерий.

Заражение Mycobacterium tuberculosis происходит воздушно-капельным путём, а Mycobacterium bovis — алиментарным (через пищевые продукты, в том числе и молоко), возможно заражение контактным путём (через раневую поверхность) и внутриутробно (от больной туберкулёзом матери к плоду).

Клинические проявления туберкулёза
Клинические проявления туберкулёза: кашель с выделением мокроты более 3-х недель, боль в грудной клетке, кровохарканье, длительное повышение температуры, потеря веса, снижение аппетита, повышенная утомляемость. Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно.

Показания:

  • воспаление эндометрия;
  • наличие перенесённого туберкулёза в анамнезе;
  • бесплодие при исключении гинекологической патологии у женщин;
  • ненормальная реакция на туберкулиновую пробу (гиперчувствительность или анергия) на фоне обострения какого-либо системного заболевания.

Подготовка
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приёма пищи.

Накануне сдачи исследования нужно исключить физические и психоэмоциональные нагрузки.

Забор крови производится в соответствующую пробирку строго до метки.

Интерпретация результатов
Тест качественный. Результат выдаётся в терминах «обнаружено» или «не обнаружено».

«Обнаружено»:

  • в анализируемом образце обнаружены специфические для микобактерии фрагменты ДНК, инфицирование микобактериями.

«Не обнаружено»:

  • в анализируемом образце не обнаружены специфические для микобактерии фрагменты ДНК или концентрация возбудителя в образце ниже границы чувствительности теста.

ПЦР диагностика туберкулеза

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

Суть метода

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

  • Кровь.
  • Слюна.
  • Мокрота.
  • Выделения из половых органов.
  • Смывная жидкость бронхов.
  • Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

  1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
  2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
  3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.
Читайте также:  Черепно мозговые нервы шпаргалка · GitHub

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-исследование туберкулеза

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

Показания для проведения ПЦР-исследования туберкулеза

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

  • Длительный контакт с больным туберкулезом.
  • Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
  • Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
  • Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
  • ВИЧ-инфекция.
  • Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
  • Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

  • Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
  • Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
  • Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
  • Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
  • Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
  • Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.
Читайте также:  Причины кровотечения при родах

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Требования к ПЦР-лаборатории

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

  • Зона приемки и сортировки проб.
  • Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
  • Зона проведения реакционных проб.
  • Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

Плюсы ПЦР-диагностики

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

  • Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
  • Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
  • ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
  • С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
  • Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
  • Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
  • Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
  • ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
  • Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы ПЦР-диагностики

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

  • Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
  • Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
  • При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
  • Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
  • Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.
Читайте также:  Артра МСМ форте – инструкция по применению таблеток, цена, отзывы, аналоги

Где пройти ПЦР-исследование на туберкулез

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

Подскажите, какая достоверность анализа ПЦР на туберкулёз? ( по крови) Какие ещё анализы подтверждают или опровергают наличие болезни?

В том то и дело, что ПЦР информативный, в СОТНИ раз информативнее всех классических тестов, (Манту вообще смешно делать в 2019 году). Не рекомендуется ПЦР лишь по одной бумаге «клинические рекомендации» Общества Фтизиатров, в котором состоят некие Внештатные Фтизиатры. Эти «рекомендации» были перепечатаны как письмо Минздрава и разосланы всем фтизиатрам в медучреждения для исполнения, чем они сейчас и руководствуются.
А рекомендуются другие тесты стоимостью от 7000 рублей и выше, и ссылаются лишь на ИНВИТРО (странно? внутренняя договоренность? раз не делаете Манту, делайте самый дорогой тест!).

Цена анализа ПЦР около 500 рублей. Наглядно видно что если признать ПЦР информативным (а он по определению информативный), то родители детей в нашей стране откажутся от пробы Манту из-за ее бессмысленности в пользу ПЦР. Минздрав теряет деньги, т.к. ПЦР в поликлинике не делают. Деньги утекают коммерческим фирмам.

Людям это выгодно и удобно, минздраву — нет.

Добрый день! Определение ДНК микобактерии туберкулеза в крови методом ПЦР не используется в качестве диагностического метода, подтверждающего или исключающего инфицирование возбудителем туберкулеза. Данный тест, как и определение ДНК палочки Коха в другом биологическом материале методом ПЦР (мокрота, менструальная кровь, моча, биоптаты лимфатических узлов и др.), предназначен для уточнения диагноза в случае обнаружения очаговых изменений в органах дыхания и наличии соответствующих жалоб, диагностики диссеминированных форм инфекции, уточнения локализации процесса и выявления активных бактериовыделителей при уже установленном диагнозе туберкулеза. В соответствии с Клиническими рекомендациями по диагностике и лечению туберкулеза (2016 г.) для исключенияподтверждения инфицирования БК (инфицирование и заболевание – не одно и то же) в настоящее время применяются проба Манту с двумя туберкулиновыми единицами (ТЕ), проба с аллергеном туберкулезным рекомбинантным (Диаскинтест), тесты освобождения гамма-интерферона (IGRA-тесты). Данные исследования в Лаборатории ИНВИТРО не проводятся.

То есть данный метод ПЦР не является информативным, в качестве диагностики.

Ссылка на основную публикацию
Пути передачи половой инфекции – половой, парентеральный, бытовой, вертикальный
Есть контакт. Какими способами могут передаваться инфекции? Способы передачи различных инфекций разнообразны. И надо знать их буквально «в лицо», чтобы...
Пункты приема одежды в России 2017 — 5789 адресов
Ребенок подрос: куда девать ненужную детскую одежду? В ожидании своего чуда, многие мамочки запасаются приданным, иногда не соблюдая чувство меры....
Пункционная биопсия кожи в Екатеринбурге – адреса и цены клиник
Сделать биопсию в Екатеринбурге: цены, адреса и запись онлайн Как подготовиться? Противопоказания ✚ Ведущие центры биопсии в Екатеринбурге; ✚ стоимость...
Пути передачи туберкулеза — Казенное учреждение Чувашской Республики; Республиканский детский против
Какими путями передается туберкулез Что такое туберкулез, особенности возбудителя, как происходит заражение через воздух, пищу, контактный путь, передача инфекции от...
Adblock detector